上海泰儿图生物科技有限公司

Shanghai Taitool Bioscience Co., Ltd

1. 背景

    在腺相关病毒（AAV）的规模化生产纯化过程中，我们发现宿主细胞（如HEK293细胞）自身表达的铁蛋白（Ferritin），由于其物理化学性质（如大小、密度、等电点）与AAV病毒颗粒存在部分相似性，会在下游纯化步骤中与AAV发生共纯化。经过工艺验证，传统的梯度离心法无法有效去除该杂质。我们通过层析纯化工艺，成功建立了能够有效去除铁蛋白的纯化方法。 铁蛋白是人体内天然存在的一种储铁蛋白，本身不具有已知的病毒性或毒性。它广泛存在于血液和组织中，是生物体内正常的组分。微量铁蛋白残留预期不会对产品的安全性（基于其天然属性）和有效性（基于其不干扰病毒感染）产生负面影响。两种产品的差异主要体现在纯化工艺的精细度和杂质谱上，而非核心功能差异。含有铁蛋白的产品由于铁离子的结合而显淡黄色。

2. 情况描述

基于上述背景，我们目前拥有不同纯化工艺路线的AAV产品：

· 蓝标： 采用了未包含上述特异性去除步骤的纯化工艺，产品中可能少量铁蛋白残留。

· 红标： 采用了未包含上述特异性去除步骤的纯化工艺，产品中可能少量铁蛋白残留。

· 金标： 采用了包含特异性去除铁蛋白步骤的层析纯化工艺，产品中铁蛋白残留水平极低或检测不到。

特此说明！

附图1：AAV产品SDS-PAGE结果对比

注：1.蓝标滴度5E+12，红标和金标滴度1E+13，上样量3uL。

2.金标个别产品由于产毒量偏低，浓缩倍数较高，也会观察到铁蛋白杂带。

附图2：AAV产品感染293T细胞结果对比

产品类型	蓝标	红标	金标
MOI =1E+5

注：S0263-9感染24孔板，细胞量2E+5 cells/Well，病毒量2E+10 v.g.，感染后48小时拍照。